238 / 264
239
Βιολογία Θετικών Σπουδών – Εκδόσεις ΜΠΑΧΑΡΑΚΗ
συνέχεια τα δύο είδη DNA, του πλασμιδίου και του δίκλωνου cDNA ,
αναμιγνύονται και, επειδή έχουν συμπληρωματικά άκρα, ενώνονται μεταξύ
τους με τη μεσολάβηση ενός ενζύμου, της DNA δεσμάσης. Προκειμένου να
δημιουργηθούν στο πλασμίδιο μονόκλωνα συμπληρωματικά άκρα με τα άκρα
του δίκλωνου μορίου cDNA, θα πρέπει να κοπεί με τις περιοριστικές
ενδονουκλεάσες Ε4 και Ε2. Το πλασμίδιο θα έχει την ακόλουθη μορφή:
Έτσι το δίκλωνο μόριο cDNA θα μπορέσει να εισαχθεί στο πλασμίδιο και θα
δημιουργηθεί το ανασυνδυασμένο μόριο DNA.
Δ4.
Από την εικόνα 5 παρατηρούμε ότι τα μετασχηματισμένα βακτήρια
παρουσιάζουν ανθεκτικότητα στο αντιβιοτικό αμπικιλίνη και επιβιώνουν στο
θρεπτικό υλικό που περιέχει το αντιβιοτικό αμπικιλίνη. Αντίθετα
παρουσιάζουν ευαισθησία στο αντιβιοτικό καναμυκίνη, με αποτέλεσμα να μην
επιβιώνουν στο θρεπτικό υλικό που περιέχει το αντιβιοτικό αυτό. Αυτό γιατί,
κατά τη δημιουργία του ανασυνδυασμένου μορίου DNA, το πλασμίδιο κόπηκε
αρχικά με την περιοριστική ενδονουκλεάση Ε4 μέσα στο γονίδιο
ανθεκτικότητας στην καναμυκίνη και καταστράφηκε η ιδιότητα της
ανθεκτικότητας στο αντιβιοτικό αυτό. Αντίθετα, το γονίδιο ανθεκτικότητας
στην αμπικιλίνη δεν επηρεάστηκε κατά τη δημιουργία του ανασυνδυασμένου
μορίου DNA. Συνεπώς τα βακτήρια που δέχθηκαν το ανασυνδυασμένο μόριο
DNA, θα παρουσιάζουν ανθεκτικότητα στο αντιβιοτικό αμπικιλίνη και
ευαισθησία στο αντιβιοτικό καναμυκίνη.
5’ C AATTC 3’
3’ GAGCT G 5’
Υποκινητής