63
Βιολογία Θετικών Σπουδών – Εκδόσεις ΜΠΑΧΑΡΑΚΗ
Έτσι τα πιθανά ανασυνδυασμένα μόρια DNA θα είναι 2, με βάση την
κατεύθυνση των αλυσίδων τους. Δηλαδή στο
υβριδοποιημένο μόριο 1
το
τελευταίο νουκλεοτίδιο στο 3΄ άκρο στην αλυσίδα 1 (πάνω) που φέρει ως
αζωτούχο βάση τη G, έχει στο 3΄ άκρο του ελεύθερο υδροξύλιο και θα ενωθεί
με 3΄ - 5΄ φωσφοδιεστερικό δεσμό με τη φωσφορική ομάδα που έχει στο 5΄
ελεύθερο άκρο του το νουκλεοτίδιο που φέρει ως αζωτούχο βάση την Α από
το
υβριδοποιημένο μόριο 2
. Ομοίως, το νουκλεοτίδιο που φέρει ως αζωτούχο
βάση την Α στο 5’ άκρο της αλυσίδας 3 (κάτω) στο
υβριδοποιημένο μόριο 1
έχει ελεύθερη τη φωσφορική ομάδα που θα ενωθεί με 3’ – 5’
φωσφοδιεστερικό δεσμό με το νουκλεοτίδιο C ή G που υπάρχει στο 3’
ελεύθερο άκρο της αλυσίδας 2 ή 4 αντίστοιχα, στο
υβριδοποιημένο μόριο 2
.
Είναι προφανές από τα παραπάνω ότι το
υβριδοποιημένο μόριο 2
, βάσει της
κατεύθυνσης των αλυσίδων του, μπορεί να ενωθεί με 2 τρόπους με το
υβριδοποιημένο μόριο 1
, γι’ αυτό και προκύπτουν 2 διαφορετικά
ανασυνδυασμένα μόρια.
Έτσι :
Ανασυνδυασμένο μόριο 1:
5΄- AAATGAAACCAGGATAAG
AATTCGGGGGGC
-3΄
3΄- ΤΤΤΑCTTTGGTCCT ATTCTTAA
GCCCCCCGTTAA
-5΄
Ανασυνδυασμένο μόριο 2:
5΄- AAATGAAACCAGGATAAG
AATTGCCCCCCG
-3΄
3΄- ΤΤΤΑCTTTGGTCCT ATTCTTAA
CGGGGGGCTTAA
-5΄
Γνωρίζουμε ότι η EcoRI, που απομονώθηκε από το βακτήριο
Escherichia coli
,
όποτε συναντά την αλληλουχία:
5'-G Α Α Τ Τ C-3'
3'-C Τ Τ A A G-5'
στο γονιδίωμα, κόβει κάθε αλυσίδα μεταξύ του G και του Α (με κατεύθυνση
5'→3') αφήνοντας μονόκλωνα άκρα από αζευγάρωτες βάσεις στα κομμένα
άκρα.
Η αλληλουχία αυτή υπάρχει μία φορά στο ανασυνδυασμένο μόριο 1, οπότε
και προκύπτουν μετά τη δράση της δύο διαφορετικά μόρια DNA. Δηλαδή:
5΄- AAATGAAACCAGGATAAG
AATTCGGGGGGC
-3΄
3΄- ΤΤΤΑCTTTGGTCCT ATTCTTAA
GCCCCCCGTTAA
-5΄




