204
Εκδόσεις ΜΠΑΧΑΡΑΚΗ – Βιολογία Θετικών Σπουδών
φωσφοδιεστερικό δεσμό. Απέναντι από Α προσθέτει U, απέναντι από Τ
προσθέτει Α και απέναντι από G προσθέτει C και αντίστροφα.
Το mRNA συντίθεται με κατεύθυνση 5΄ → 3΄ με μεταγραφή της μη κωδικής
αλυσίδας με βάση τον κανόνα της συμπληρωματικότητας και της
αντιπαραλληλίας. Επομένως, το mRNA που προκύπτει από τη μεταγραφή της
μη κωδικής αλυσίδας φέρει την ακόλουθη αλληλουχία (μεταγράφεται
ολόκληρη η αλυσίδα ΙΙ):
mRNA 5΄
GGCUUAUAAGG
AUG
-CCG-UAC-GAG-
UAA
AUUAUAACCG
3΄
Δ4.
Η αλληλουχία που αναγνωρίζει η περιοριστική ενδονουκλεάση είναι η:
3΄AATATT 5΄
5΄TTATAA 3΄
Αυτό γιατί η περιοριστική ενδονουκλεάση θα πρέπει να κόψει εκατέρωθεν του
γονιδίου ούτως ώστε να δημιουργήσει μονόκλωνα άκρα από αζευγάρωτες
βάσεις στα κομμένα άκρα και να μπορέσει έτσι το γονίδιο να εισαχθεί στο
πλασμίδιο, το οποίο θα κοπεί φυσικά με την ίδια περιοριστική
ενδονουκλεάση. Έτσι από τη στιγμή που παρατηρούμε ότι η συγκεκριμένη
αλληλουχία βρίσκεται τόσο αριστερά όσο και δεξιά στο γονίδιο, είναι αυτή
που θα αναγνωρίσει η περιοριστική ενδονουκλεάση δ, που επιλέχθηκε στο
ερώτημα Δ1.
Δ5.
Η μεταγραφή ενός γονιδίου ξεκινά μετά την πρόσδεση της RNA πολυμεράσης
στον υποκινητή του γονιδίου, μια αλληλουχία στο δίκλωνο DNA που πρέπει να
προηγείται του γονιδίου. Επίσης, η μεταγραφή του γονιδίου σταματά στις
αλληλουχίες λήξης της μεταγραφής που ακολουθούν την αλληλουχία του
γονιδίου.
Το ανθρώπινο γονίδιο που εξετάζουμε κόπηκε με την περιοριστική
ενδονουκλεάση δ και δημιουργήθηκαν μονόκλωνα άκρα από αζευγάρωτες
βάσεις στα κομμένα άκρα. Με την ίδια περιοριστική ενδονουκλεάση δ κόπηκε
και το αντίστοιχο πλασμίδιο. Κατά την επώαση του γονιδίου με το πλασμίδιο
είναι δυνατόν το γονίδιο να ενσωματωθεί με δύο πιθανούς τρόπους:
i)
με τέτοιο προσανατολισμό ώστε το κωδικόνιο έναρξης της κωδικής
αλυσίδας 5’ ATG 3’ να βρίσκεται κοντά στον υποκινητή του γονιδίου και
το κωδικόνιο λήξης 5’ ΤΑΑ3’ κοντά στις αλληλουχίες λήξης της
μεταγραφής. Σ’αυτήν την περίπτωση το γονίδιο εκφράζεται κανονικά και
οι βακτηριακοί αυτοί κλωνοι παράγουν το ολιγοπεπτίδιο.




